☆以下のプロトコールは、添付の説明書に基づいたものですが、一部使いやすいように変更を加えています。液体窒素で凍傷しないように気をつけて実験を行うこと。

1. 1)新鮮試料を液体窒素で瞬間凍結する。あるいは、-80℃で保存してある試料を液体窒素中に移す。
   

2. 2)専用の2 mLマイクロチューブ(丸底)にメタルコーンを入れて蓋をし、液体窒素で冷却する。同時に、チューブホルダーの留め具だけ外しておいて、液体窒素中に浸けておく。
   

3. 3)液体窒素中で冷やしたピンセットを使って、試料を２）のチューブに移す。200 mgくらいまでが適当と思われる。作業をしている間に融けてしまわないよう、時々液体窒素中で冷やしながら移すと良い。
   

4. 4)必要量採取したら、チューブを液体窒素中のチューブホルダーに移す。３本になるまで、この状態のままおいておいてよい。
   

5. 5)チューブホルダーを液体窒素中から取り出し、留め具を装着する。
   

6. 6)蓋を閉めた後、もう一度液体窒素中に投入し、しっかりと冷却する。
   

7. 7)冷えたチューブホルダーを取り出し、本体の筒内に入れる。筒の蓋には上下はないので開けやすい方を開ける。
   

8. 8)蓋を閉め、約30回激しく振る。
   

9. 9)直ちに蓋を開け、チューブホルダーを取りだし、留め具を外す。
   

10. 10)中からチューブを取り出し、これを液体窒素中へ戻す。この作業を行うことで、メタルコーンに付着した植物試料が離れやすくなる。[チューブが割れている場合→下欄参照]
    

11. 11)液体窒素からチューブを取り出し、ピンセットでメタルコーンを取り出す。なるべく粉砕試料の持ち出しの少ないように注意する。
    

12. 12)チューブの蓋をし直して、微粉砕作業は終了。直ぐに使わない場合、粉砕試料は-80℃で保存する。
    

[チューブが割れている場合]

凍結したチューブは粉砕作業後にしばしば割れている。割れたチューブを液体窒素中に戻すと流れ出てしまい、かなりのロスが出かねない。サンプルホルダーからチューブを出したときに割れている場合、液体窒素中に入れず、即座に新しいチューブに移す。その手順は以下の通り。

1. a)新しいチューブをを用意してラベルを書き直す。
   

2. b)チューブは液体窒素中で冷却してとりだす。
   

3. c)試料が融けかけていない限り、ここでメタルコーンを取り出す。メタルコーンは後からでも除去できるが、可能なら新しいチューブに移す前に取り除いておくとピンセットでつまみやすい。
   

4. d)割れたチューブと新しいチューブの口がずれないように合わせ、ひっくり返して内容物を新しい方に移す。壁面に付着している場合、机の上でたたくようにすると比較的容易に移せる。
   

5. e)即座に液体窒素中で冷却する。