Protocols
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★事前に用意するもの
・培地(一般的には1/2MS, -Sucrose, Hormone free, 0.25% Gellan Gum or 0.8% Agar)
・0.1% Agarose(滅菌)
・滅菌水道水
・滅菌1.5 mL容チューブ(エッペンチューブ)
・ピンセット
・1/10希釈 次亜塩素酸ナトリウム溶液
・1000 µL マイクロピペット
・1000 µL 滅菌チップ
○手順
1)シロイヌナズナの種子を適宜エッペンチューブに取る
2)1/10希釈次亜塩素酸ナトリウム溶液を400 µL程度入れてよく振る(種子に泡が付着したままにならぬように注意)
3)卓上遠心機で数秒間遠心して液と種子を全て底に集める
※ここから先はクリーンベンチ内で作業
4)滅菌チップをつけたマイクロピペットで、種子のみ残し、次亜塩素酸ナトリウム溶液を吸い出す
5)滅菌水道水を1 mL程度加え、チューブにふたをしてよくゆすぐ
6)卓上遠心機で数秒間遠心して液と種子を全て底に集める
7)滅菌チップをつけたマイクロピペットで、種子のみ残し、洗浄液を吸い出す
8)5〜7の操作(滅菌水でのゆすぎ)を3〜4回行う
9)0.1% Agaroseを400 µL程度(種子の数により適宜変更する)加え、ピペッティングで懸濁する
10)種子は0.1% Agarose中では沈まないので、適当な量を吸い取って1粒ずつ培地上に置いていく
11)播種後、培地の入ったシャーレはサージカルテープ(など)で封をして静置培養する
※必要に応じて、春化処理(4˚C、暗所[アルミホイルにくるんでも良い]、3〜7日)を行う。
シロイヌナズナの無菌播種
Monday, February 20, 2012